传代细胞的传代方法及操作过程实验原理传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。这种培养，*步也是制备细胞悬液，当细胞长成致密单层时，它很容易被蛋白水解酶和EDTA）所破坏。所以—般采用胰蛋白酶和EDTA（乙二胺四乙酸盐）的混合物，做为消化液。细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、...

李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届微生物学大会命名为李斯特菌。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境...

培养细胞的常规检查和观察方法细胞培养后,需要对其生长状况、形态甚至生物学性状连续地进行观察.由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,则难以观察期形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能.目前,已有多种研究细胞的技术,从光学显微镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法.细胞培养后,需要对其生长状况、形态甚至生物学性状连续地进行观察.由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,则难以观察期形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能.目前,已有多种研究细胞的技术,从光...

上皮细胞的培养方法上皮细胞的培养方法上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视.但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键.体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象.降低PH、Ca...

细胞的复苏及冻存方法一.细胞复苏与培养将液氮或-80℃保存的星空体育网页版登录 于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培养基混匀已融化的星空体育网页版登录 悬液，于1500转/分，离心3分钟。弃上清，再吸取8.0ml培养基质混匀细胞沉淀，再1500转/分，离心3分钟，弃上清，细胞沉淀用1.0ml培养基混匀，备用。另取一个75cm2方瓶，加入14.0ml培养基质，将上述制备的含星空体育网页版登录 悬液（1.0ml）加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培养。若此星空体育网页版登录 悬浮生长，大约3－4天细胞基质会变黄，5....

微生物菌种冷冻干燥和液氮保藏菌种技术－、安瓶管开封1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。2．用火焰将安瓿管顶端加热。3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。二、菌株恢复培养1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。2．取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。3．若未能活化，或活化后有...

大肠杆菌一般培养方法使用牛肉膏蛋白胨培养基组成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,琼脂15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。具体配置步骤：1.称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.2.加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品*溶解...

细胞传代的一般方法开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞（单层细胞，镜检适合）、培养液（MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液）、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1万单位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶（100m1）、克氏瓶、胶塞、吸管（10ml、1m1）、细胞吹打管（20ml）（以上用具需经121℃至少15分钟高压灭菌）C02孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰...